論免疫金標(biāo)記技術(shù)的發(fā)展

　　免疫膠金標(biāo)記技術(shù)的發(fā)展已不僅僅局限在其作為示蹤標(biāo)志物的功能方面，已有關(guān)于放大檢測信號方法研究的報(bào)道。生物素?親和素系統(tǒng)應(yīng)用于免疫金標(biāo)記技術(shù)，帶正電荷的鏈霉親和素標(biāo)記在帶負(fù)電荷的膠體金顆粒上，又能與生物素緊密結(jié)合，使檢測信號在只有膠體金標(biāo)記的基礎(chǔ)上得到擴(kuò)大[14]。Hou等[15]利用縮氨酸與硝酸纖維素膜的相互作用固定生物素抗體于膜上，并分別采用有無銀增強(qiáng)金標(biāo)記技術(shù)檢測生物素化縮氨酸，無銀增強(qiáng)檢出限為100 amol/mL，銀增強(qiáng)金標(biāo)記檢出限可達(dá)100 zmol/mL。Tanaka等[16]將一抗也標(biāo)記上膠體金，作為信號增強(qiáng)子從而提高檢測的靈敏度，可檢測到人血清中10 pg/mL HCG，達(dá)到了ELISA方法檢測的靈敏度。Ambrosi等[17]采用雙標(biāo)記方法將酶標(biāo)二抗標(biāo)記在膠體金上，一個15 nm的膠體金顆粒上可以標(biāo)記約10個酶標(biāo)二抗分子，其檢測靈敏度比常規(guī)ELISA方法更高。

　　抗原（Antigen）； 銀顆粒（Silver nanoparticle）； 金顆粒（Gold nanoparticle）； 抗體（Antibody）。近年來，免疫膠體金標(biāo)記技術(shù)得到了不斷地發(fā)展和改進(jìn)，微波（MW）技術(shù)開始應(yīng)用其中。Galvez等[13]在不改變其它實(shí)驗(yàn)條件的情況下采用微波技術(shù)進(jìn)行標(biāo)記，使標(biāo)記過程中固定時間至少縮短20 min。 兩種技術(shù)的結(jié)合使標(biāo)記效果更好，背景清晰，而且縮短染色時間。同時增加反應(yīng)強(qiáng)度后較常規(guī)方法所需抗體濃度低，可節(jié)約價格昂貴的一抗。

　　Nam等[18]在免疫金標(biāo)記技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展了BCA（Ｂio?barcode amplification）擴(kuò)增技術(shù)，金顆粒表面修飾了起信號放大作用的條形碼DNA和針對待測蛋白的抗體，磁微粒表面則修飾待測蛋白的另一種單克隆抗體。兩者與待測蛋白形成復(fù)合結(jié)構(gòu)，復(fù)合物經(jīng)過磁場分離，金顆粒受熱變性釋放條形碼DNA，通過對其進(jìn)行無PCR或PCR檢測，間接檢測目標(biāo)蛋白，檢出限分別達(dá)30和3 amol。經(jīng)過多次信號放大技術(shù)，克服了對酶促反應(yīng)的依賴，檢測靈敏度比ELISA高103～106倍，并可同時檢測多個蛋白[19]。鐘曉琴等[20]在BCA方法的基礎(chǔ)上，將膠體金免疫標(biāo)記技術(shù)與酶免疫標(biāo)記技術(shù)有效地結(jié)合起來，制備酶標(biāo)金探針。其靈敏度高且步驟簡單，只需普通光學(xué)儀器即可檢測蛋白質(zhì)。通過對免疫金標(biāo)記技術(shù)研究工作的不斷深入，必將使該技術(shù)的使用效果更佳，應(yīng)用于更多的研究領(lǐng)域。

　　免疫層析法（Immunochromatography）是20世紀(jì)90年代興起的一種快速診斷技術(shù)，膠體金免疫層析技術(shù)（GICA）就是利用膠體金本身的顯色特點(diǎn)結(jié)合免疫層析技術(shù)診斷特異性的待測物而發(fā)展起來的。這項(xiàng)技術(shù)既可采用雙抗體夾心法測抗原，又可用間接法、競爭法測抗體。在該技術(shù)基礎(chǔ)上研制的膠體金免疫層析試紙條、試劑盒操作起來方便快捷，應(yīng)用前景廣闊。

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